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Práctica. Extracción de ADN

El ADN de organismos eucariotas se puede extraer fácilmente de cualquier célula que presente núcleo. Para la presente práctica se recomienda usar hígado de pollo, cebolla y plátano, pues se puede obtener en grandes cantidades de dichos materiales. También se propone extraer ADN humano (del carrillo) que, aunque no se puede obtener en grandes cantidades de las pocas células que se desprenden del carrillo, siempre resulta de interés al alumno, poder observar su propio ADN o de algún compañero y poder comprobar que el de los vegetales y animales, al menos a simple vista resultan semejantes.

Objetivo. Obtener ADN de diferentes tipos de células vegetales y animales (en estos últimos, se incluye a los humanos), para observarlo a simple vista, identificarlo y compararlos entre si.

Una sesión antes de hacer la práctica se debe de encargar a los alumnos una investigación sobre cómo identificar ADN mediante algún reactivo para estar seguros que las hebras que obtengan son de ADN. Se deberán presentar las propuestas en clase antes de empezar la práctica en una sesión grupal y, el profesor seleccionará la más adecuada para incluirla en el material.

Material para la extracción del ADN en cebolla, plátano e hígado de pollo:

Plátano

Cebolla

Hígado de pollo

Cloruro de sodio (sal)

Agua tibia

Licuadora

Jabón líquido

Palillo de dientes

1 Coladera fina

3 tubos de ensaye

Etanol de 96º

Mechero y soporte universal

1 vaso de precipitado de 250 ml.

4 portaobjetos

Navaja o bisturí

Procedimiento.

1. Cortar por separado el plátano en rebanadas delgadas, la cebolla y el hígado en porciones de 2 gramos aproximadamente. Se necesitará aproximadamente un cuarto de plátano y un cuarto de cebolla de mediano tamaño. El hígado será suficiente con el de un solo pollo.

2. Poner en la licuadora por separado cada material, agregar un gramo de cloruro de sodio y cubrir con agua tibia.

3. Licuar entre 5 y 10 segundos a baja intensidad, con la finalidad de no romper mucho las fibras de ADN.

4. Se cuela y se coloca en un tubo de ensaye aproximadamente llenando hasta la mitad.

5. Agregar dos cucharaditas de jabón líquido y revolver con suavidad evitando la formación de burbujas.

6. Con cuidado verter el alcohol por las paredes del tubo sin que se revuelva con la mezcla anteriormente colocada, para formar dos fases.

7. Esperar (aproximadamente cinco minutos) a que las fibras de ADN se desprendan de la capa inferior y se desplacen (suban) a la superior (se ven como fibras o hilos de color blanco). Cuando haya suficientes se deberán extraer el ADN que flota en el liquido con un palillo haciéndolo girar para que se enrolle en él el ADN y se coloca en un portaobjetos.

El mismo procedimiento se realiza para la cebolla y el hígado de pollo.

Si se dispone de poco tiempo o material de laboratorio, se puede asignar a diferentes equipos la extracción del ADN de alguno de los materiales, teniendo la precaución de que obtengan suficiente para posteriormente compartir con los otros equipos el ADN obtenido.

Recomendaciones.

1. Cuando se vierta el alcohol, asegúrese de que queden dos capas separadas (en la parte de abajo el plátano, cebolla o hígado y arriba el alcohol)

2. Cuando se extraiga el ADN, girar el palillo lentamente para evitar que se rompa la molécula de ADN.

Extracción de ADN Humano

Material

Cloruro de sodio

Jabón líquido

2 vasos desechables

1 botella de agua para beber

agua destilada

2 tubos e ensaye

1 tapón para tubo de ensaye

1 probeta de 100 ml

Etanol de 96º

Balanza

Agua destilada

Palillos

Procedimiento.

1. Poner 8 gramos de cloruro de sodio en uno de los vasos desechables y disolver en 92 ml de agua destilada.

2. En el segundo vaso desechable poner 25 ml. de jabón líquido con 75 ml de agua destilada.

3. Poner un mililitro de la solución de cloruro de sodio en un tubo de ensaye

4. Con el agua embotellada hacer un buche de aproximadamente 10 ml., enjugarse la boca vigorosamente por 30 segundos (para desprender células del epitelio del carrillo).

5. Poner el agua del buche en el segundo vaso desechable y vaciarlo en el tubo de ensaye que contiene la solución de cloruro de sodio.

6. Agregar un mililitro de jabón líquido al tubo de ensaye

7. Cubrir el tubo con el tapón y mezclar agitando el tubo suavemente.

8. Dejar resbalar por las paredes del tubo 5 mililitros de alcohol, inclinando un poco el tubo de ensaye y, como se procedió con los materiales anteriores no se debe mezclar el alcohol con el agua del buche y se deben formar dos capas, quedando el alcohol por encima de la primera.

9. Esperar aproximadamente cinco minutos a que suban las fibras de ADN. En este caso, por el escaso número de células desprendidas del carrillo no se obtendrán muchas hebras de ADN.

10. Con un palillo sacar las hebras de ADN y colocarlas en un portaobjetos.

Hacer un informe de la práctica

Incluir en el informe la respuesta a las siguientes preguntas:

¿Para qué se usa el cloruro de sodio?

¿Qué objetivo tiene utilizar el jabón liquido?

¿Por qué se deben formar dos fases en los tubos de ensaye antes de que floten las hebras de ADN.